Montse Verdú1,3, Natalia Rodón1, Ruth Román1, Beatriz García-Peláez1, Mercè Pujol1, Isabel Trias1.2.3, Xavier Puig1,2,3.
1Biopat. Biopatologia Molecular, SL, Grup Assistència; 2Hospital de Barcelona, SCIAS, Grup Assistència; 3Histopat Laboratoris. Barcelona.
Introducción
La asociación entre mutaciones de EGFR y respuesta a terapia mediante TKIs en cáncer de pulmón, ha convertido su estudio en un requerimiento indispensable. La introducción de anticuerpos monoclonales específicos para su análisis mediante inmunohistoquímica (IHQ), técnica asequible y de bajo coste, podría facilitar su incorporación en la práctica rutinaria. El objetivo de este estudio fue determinar la utilidad de la IHQ mediante la comparación de resultados con la secuenciación y la PCR a tiempo real.
Materiales y métodos
Se analizaron 85 adenocarcinomas primarios de pulmón, clasificados mediante estudio microscópico e inmunohistoquímico (CK7, CK20, TTF1, p63, CK5/6 y 34βE12). La presencia de mutaciones de EGFR E746_750del en el exón 19 y L858R en el exón 21 se estudió por IHQ y se estableció el estado mutacional del gen mediante secuenciación, reevaluando los casos negativos por PCR a tiempo real, o utilizando directamente esta última técnica.
Resultados
La IHQ para la deleción del exón 19 resultó negativa en 75 de los 85 casos estudiados (88%), no concluyente en 6 (7%) y positiva en 4 (5%). Los 75 negativos se confirmaron mediante ambas técnicas moleculares. Tres de los casos positivos y uno de los no concluyentes fueron positivos por secuenciación. El cuarto caso positivo por IHQ se confirmó por PCR a tiempo real, resultando también positivos para esta técnica dos de los casos no concluyentes.
La IHQ para la mutación L858R del exón 21 resultó negativa en 81 de los 85 casos estudiados (95%) y positiva en 4 (5%). Los 81 negativos lo fueron también por secuenciación, mientras que la PCR a tiempo real permitió detectar la mutación en uno de ellos. Uno de los casos positivos por IHQ se confirmó por secuenciación y otros dos por PCR a tiempo real, mientras que el cuarto resultó negativo con ambas técnicas.
Conclusiones
La implementación de la IHQ para la detección de las mutaciones más prevalentes de EGFR en los laboratorios de anatomía patológica puede resultar de utilidad como técnica complementaria al estudio molecular.
De acuerdo con nuestros resultados, el anticuerpo anti-E746_750del permitiría restringir el uso de técnicas moleculares a aquellos casos no concluyentes para IHQ (7%).
Con el anticuerpo anti-L858R se obtienen, respecto a la PCR en tiempo real, un falso negativo y un falso positivo.